QIAGEN Ni-NTA Agarose現貨30210/30230/30250
QIAGEN Ni-NTA Agarose現貨30210/30230/30250
A Agarose是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的組氨酸殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結合,其他蛋白則流過(guò)基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
QIAGEN Ni-NTA Agarose現貨30210/30230/30250
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的組氨酸殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結合,其他蛋白則流過(guò)基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
利用重力流層析純化His-tagged蛋白
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的組氨酸殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結合,其他蛋白則流過(guò)基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
在天然條件下一步純化蛋白。
在天然條件下純化蛋白。人血清應答因子(SRF)在帶有牛痘病毒載體的HeLa細胞中表達,使用Ni-NTA Agarose以及在洗滌和洗脫步驟中不同濃度的咪唑純化。銀染法使得蛋白可見(jiàn)。CL:細胞裂解物;FT:流過(guò)部分;W1: 0.8 mM洗滌液;W2 & W3: 8 mM 洗滌液;W4 & W5: 40 mM 洗滌液;E1 & E2: 80 mM 洗脫液。(數據由德國H. Stunnenberg, EMBL, Heidelberg提供。)
Performance
Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA與Sepharose CL-6B support偶聯(lián),具有強結合能力,非特異性結合少(參見(jiàn)"One-step purification under native conditions")。這種材料對于多數的生產(chǎn)規模和柱純化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可單獨訂購,也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是適用于大腸桿菌His-tagged蛋白高效表達和純化的完整試劑盒。
Principle
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得的Ni-NTA(氨基三乙酸鎳)樹(shù)脂,對含有6個(gè)或以上組氨酸殘基(連續或交替)親合標簽的蛋白選擇能力強。該技術(shù)可在天然或變性條件下,從所有表達體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個(gè)鎳離子螯合位點(diǎn),與鎳的結合能力比其他僅有三個(gè)金屬螯合位點(diǎn)的金屬螯合純化方法的結合能力強。多出的一個(gè)螯合位點(diǎn)可防止鎳離子脫落,因此具有更強的結合能力,蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術(shù)可用于從桿狀病毒、哺乳動(dòng)物細胞、酵母和細菌等各種表達體系中純化His-tagged蛋白。
Procedure
His-tagged蛋白的純化包括四個(gè)步驟:裂解、結合、洗滌和洗脫(參見(jiàn)Protein purification with the Ni-NTA protein purification system)。使用QIAexpress 技術(shù)純化重組蛋白無(wú)需依賴(lài)于蛋白的三維結構或6xHis標簽。因此可實(shí)現在天然或變性條件下,從稀釋溶液或細胞裂解液中一步純化蛋白。可使用強變性劑和洗滌劑高效溶解和純化受體、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結合產(chǎn)物的試劑(見(jiàn)表)。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值,可洗脫得到純化蛋白。