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血清使用中的常見(jiàn)問(wèn)題
瀏覽次數:4617發(fā)布日期:2014-09-18

? 如何解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,推薦將其置于室溫下使之*融解。必須注意的是,融解過(guò)程中必須不時(shí)地搖晃均勻,血清融解后不可在室溫下放置過(guò)長(cháng)時(shí)間。
? 血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理? 沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì )自然消失。
? 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
1. 解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
2. 血清分裝凍存時(shí),須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
3. 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。
4. 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì )變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成份也會(huì )因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
5. 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
6. 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì )造成沉淀物的增多。
? 培養基中添加了血清和抗生素后,可長(cháng)期保存嗎?
一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí),您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。
? 保存血清的方法?
我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
? 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組
胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究,培養ES 細胞、平滑肌細胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
? 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對
細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造
成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多,這些沉淀物在倒置顯微
鏡下觀(guān)察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又
會(huì )使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
? 細胞培養中出現黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養的過(guò)程中發(fā)現有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀(guān)察培養基是否混濁,然后,在鏡下
觀(guān)察培養細胞生長(cháng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細胞被污染,微生物則會(huì )大量繁殖,培養基就會(huì )迅速
變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀(guān)察細胞,生長(cháng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現前相比,沒(méi)有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現可
能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細胞生長(cháng)過(guò)老,破碎的細胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,反復凍融的結果;
(3)配制培養基的pH 值偏高,不宜細胞生長(cháng);
(4)配制培養基的水質(zhì)、容器不合格。可應用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);
(5)培養原代細胞中出現小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
? 細胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數。
(2) 培養基無(wú)需37℃水浴。
(3) 培養基保持*PH 值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養基的水質(zhì),容器定期刷洗。

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